《臨床生物化學(xué)》 四、其它方法

離子選擇電極法，旋光法等有時(shí)用于測(cè)定特定的酶，當(dāng)酶反應(yīng)牽涉到有酸堿變化時(shí)，很容易用pH儀直接觀察酶反應(yīng)過程中H+的變化。直接用pH儀測(cè)酶反應(yīng)有兩個(gè)缺點(diǎn)：一是隨pH變化，會(huì)偏離酶作用的最適pH值，不可避免地引起酶反應(yīng)速度變慢。其二是如測(cè)定的標(biāo)本不是純酶時(shí)標(biāo)本中其他蛋白及其它有緩衡能力的物質(zhì)將會(huì)影響所測(cè)pH變化的程度。此時(shí)如改用電位滴定儀則更為適合。此儀器可在酶反應(yīng)過程中不斷向反應(yīng)體系中加入酸或堿以維持反應(yīng)體系pH的恒定，而加入的酸堿量只與體系中H+變化量相關(guān)，和反應(yīng)體系中緩衡能力無關(guān)。

同樣如酶反應(yīng)中有O2變化，可使用氧電極來監(jiān)測(cè)酶反應(yīng)過程，這可用來測(cè)定葡萄糖氧化酶活性，Chappell還成功地將此技術(shù)用于測(cè)線粒體的氧化能力。還曾有人嘗試用二氧化碳和氨電極測(cè)酶，由于這些電極反應(yīng)時(shí)間較慢，不利于檢測(cè)酶反應(yīng)速度。有些酶的反應(yīng)物為光學(xué)異構(gòu)體，則可根據(jù)旋光度變化來追蹤酶反應(yīng)。某些反應(yīng)物如羥基酸本身雖無旋光性，但與鉬結(jié)合后產(chǎn)生很高的旋光性。根據(jù)此特性建立了測(cè)定延胡索酸水合酶的方法。還有個(gè)別酶的測(cè)定使用了極譜法、高效液相色譜法等?？傊?，實(shí)驗(yàn)室工作者完全可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器和技術(shù)，創(chuàng)造性地建立一些新的測(cè)活性濃度的方法。