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高效液相色譜衍生化法測定腦脈康中冰片含量簡單準確
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日前，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院藥劑科研究人員經研究發(fā)現(xiàn)，采用高效液相色譜衍生化法測定腦脈康中的冰片含量，方法簡單、準確、可行。
冰片具有通諸竅、散郁火、消腫止痛之功能，常用于內服及外用中成藥中。由于冰片化學結構無特征紫外吸收，因此主要采用薄層掃描法和氣相色譜法。高效液相色譜儀是實驗室常見分析儀器，適用于常見中成藥成分的分離和測定，但紫外吸收弱的化合物直接檢測較為困難。
研究人員根據(jù)冰片結構中含羥基的特點，將3，5-二硝基苯甲酰氯可作為此類化合物的衍生化試劑，在叔胺或吡啶類化合物的催化下可和冰片反應生成具強紫外吸收的3，5-二硝基苯甲酸冰片酯。為建立一種測定腦脈康中冰片含量的新方法，研究人員利用此原理以反相高效液相色譜法（HPLC）對腦脈康中冰片含量進行了測定方法學研究。他們將柱前衍生化試劑在乙腈中反應，以3，5-二硝基苯甲酰氯為衍生化試劑（與冰片的摩爾比為20倍），4-二甲氨基吡啶為催化劑（與冰片的摩爾比為40倍）。然后在ODS柱上，以甲醇誜水（88誜12）為流動相，檢測波長225納米，高效液相色譜測定腦脈康中冰片含量。
研究結果發(fā)現(xiàn)，冰片在1~10微摩爾范圍內，色譜峰面積與進樣量呈線性關系（R2=0.9996，P<0.01）。兩批腦脈康中冰片的含量分別為7.9%和7.1%，RSD分別為1.0%和1.5%（n=5）。平均回收率為99.9%，RSD為1.8%(n=4)。
據(jù)研究者介紹，冰片是一味常用的中藥，有合成和天然之分，主要成分是互為異構體的龍腦和異龍腦。其化學結構無特征紫外吸收，無法直接用實驗室常見分析儀器高效液相色譜儀進行含量測定，因此采用衍生化HPLC法是測定這類化合物較好的方法。冰片結構中含羥基，而3，5-二硝基苯甲酰氯是羥基化合物常用的衍生化試劑，在叔胺或吡啶類化合物的催化下可和冰片反應生成3，5-二硝基苯甲酸冰片酯。這種新化合物具有較強的紫外吸收，龍腦和異龍腦在此色譜條件下顯示為單峰，從而利用柱前衍生化反相HPLC法間接完成了腦脈康中冰片含量的測定。此法采用的衍生化反應條件簡單，衍生化產物穩(wěn)定，樣品前處理容易，具有較好的線性關系和回收率，有可能也適用于其他含冰片中成藥的質量控制。