川烏、草烏、附子及其復(fù)方制劑中烏頭類生物堿的含量測(cè)定研究概況

川烏、草烏、附子及其炮制品均為中國(guó)藥典1995年版一部收載的常用中藥。中醫(yī)認(rèn)為這些藥具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛的作用?，F(xiàn)代藥理研究證明，烏頭類中藥具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、抗炎、抗腫瘤等作用。由于其主要有效成分為劇毒的雙酯型生物堿，而且治療量與中毒量接近。為確保臨床用藥安全有效，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在烏頭類生物堿的含量測(cè)定方面做了大量工作。1　分光亮度法1.1　酸性染料比色法　趙玉梅等［1］選擇溴麝香草酚藍(lán)作為酸性染料，比色法測(cè)定骨痹痛散中烏頭總生物堿含量，以烏頭堿(12.06mg/50ml，0.05mol/L H2SO4)作對(duì)照，提取液于波長(zhǎng)412nm處測(cè)定吸光度并計(jì)算出烏頭總堿含量。平均回收率為97.54%。烏蘭娜日等［2］選擇溴甲酚綠為酸性染料，以烏頭堿(10mg/100ml，氯仿)作對(duì)照，于波長(zhǎng)(415±1)nm處測(cè)定附子理中丸中烏頭總堿含量。平均回收率為99.5%，RSD為1.43%。王海孫等［3］選擇文獻(xiàn)［2］的條件測(cè)定風(fēng)濕骨痛酒中烏頭總生物堿含量，平均回收率為98.58%，RSD為1.83%，因處方中有麻黃，所以提取液在水浴上揮去溶劑后應(yīng)在105℃烘1h以使麻黃堿揮發(fā)，排除干擾。陶建生等［4］選擇溴甲酚綠為酸性染料，以烏頭堿做對(duì)照于波長(zhǎng)416nm，處測(cè)定止痛酊中烏頭總堿含量。平均回收率為96.9%，RSD為3.0%。楊云［5］以溴麝香草酚藍(lán)為酸性染料，波長(zhǎng)408nm處測(cè)定附子理中口服液中烏頭總生物堿含量，平均回收率96.79%。

1.2　一階導(dǎo)數(shù)分光光度法　龍沛霞等［6］采用一階導(dǎo)數(shù)光譜法測(cè)定制川烏、制草烏及附子中烏頭生物堿含量。測(cè)得結(jié)果與中國(guó)藥典(1995年版)方法的測(cè)定結(jié)果比較無顯著差異，而該方法操作起來更簡(jiǎn)便。

1.3　二階導(dǎo)數(shù)分光光度法　徐思文［7］采用二階導(dǎo)數(shù)光譜法測(cè)定三七傷藥片中總生物堿含量，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液在波長(zhǎng)(238±2)nm和(246±2)nm處有相應(yīng)的吸收谷和吸收峰，而陰性對(duì)照光譜呈近平行線，不干擾樣品中烏頭總生物堿的定量分析。所以選擇此兩波長(zhǎng)谷峰之間的導(dǎo)數(shù)振幅值作為三七傷藥片中總生物堿的定量依據(jù)。平均回收率為99.3%。2　薄層掃描法2.1　高效硅膠G板-薄層色譜　鎮(zhèn)痛寧注射液是由制川烏、鹽酸異丙嗪等中西藥結(jié)合的復(fù)方制劑，因處方中異丙嗪具堿性，用堿量法測(cè)定烏頭堿含量有影響。李煥榮等［8］選擇高效硅膠G板，以氯仿-醋酸乙酯-氨水(15∶20∶1)為展開劑展開，噴以碘化鉍鉀顯色后，雙波長(zhǎng)(λs=520nm，λR=650nm)鋸齒形反射掃描測(cè)定烏頭總堿含量。平均回收率為97.85%，RSD為1.98%。

2.2　硅膠GF254板-薄層色譜　劉成基等［9］選擇硅膠GF254板，用25%氨水飽和后于氯仿-乙醚(1∶25)展開劑中展開，紫外燈下定位，雙波長(zhǎng)(λs=240nm,λR=400nm)鋸齒形反射掃描，分別測(cè)得草烏及其炮制品中酯型烏頭堿含量。鄒恩濟(jì)等［10］用文獻(xiàn)［9］的薄層條件測(cè)定蒙成藥那如-3和嘎日迪-5中三種酯型烏頭堿含量，效果良好。北川熏等［11］選擇硅膠GF254板，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺(10∶5∶1)為展開劑，雙波長(zhǎng)(λs=250nm,λR=400nm)掃描，考查多種烏頭及其炮制品中生物堿的種類及含量差異。

2.3　硅膠G板-薄層色譜　王浴銘等［12］選擇硅膠G板，以正己烷(氨水飽和)-乙酸乙酯-95%乙醇(64∶36∶10)為展開劑展開，碘蒸氣顯色后，雙波長(zhǎng)(λs=365nm,λR=270nm)鋸齒形反射掃描測(cè)定活血壯筋丹中烏頭總堿含量。平均回收率為95.75%，RSD為0.824%。楊基生等［13］選擇硅膠G板，以苯-乙酸乙酯-二乙胺(7∶2∶0.4)為展開劑，以改良碘化鉍鉀顯色，于波長(zhǎng)495nm處掃描測(cè)定復(fù)方中藥橡皮膏中烏頭堿含量。平均回收率為99.3%。

2.4　G-CMC-Na板-薄層色譜　陳曉斌等［14］選擇硅膠G-0.5%CMC-Na板，以正丁醇-苯-乙酸乙酯-甲醇-氨水(20.3∶14.5∶2.3∶1.5∶3.0)為展開劑展開，噴以0.05mol/L硫酸-碘化鉍鉀顯色后，于波長(zhǎng)(λs=503nm,λR=550nm)鋸齒形反射掃描測(cè)定風(fēng)濕痹痛丸中毒性成分士的寧、馬錢子及烏頭堿含量，其中烏頭堿平均回收率為99.1%，RSD為1.2%。3　高效液相色譜法3.1　內(nèi)標(biāo)法　鄒恩濟(jì)等［15］采用反高效液相色譜法，以甲萘基為內(nèi)標(biāo)，分離測(cè)定兩種蒙成藥那如-3、嘎日迪-5中草烏的3種劇毒性成分，選擇色譜柱為150mm×4.6mm id的不銹鋼柱；流動(dòng)相甲醇-水-氯仿-三乙醇(70∶30∶2∶0.1)，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm。平均回收率：中烏頭堿98.7%，RSD＝2.1%；烏頭堿93.65%，RSD為1.1%；次烏頭堿101.7%，RSD＝3.2%。

3.2　外標(biāo)法　北川熏等［16］采用Kadial-Pak CN柱，以乙腈-0.01mol/L二丁基胺磷酸鹽(55∶45)為流動(dòng)相，測(cè)定多種中藥中烏頭類生物堿含量。Hideo Bando等［17］采用Nucleosil CN柱，以0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(pH2.5)-乙腈(71∶29)為流動(dòng)相，測(cè)定日本烏頭中雙酯型生物堿含量。彭波等［18］采用Hh反高效液相色譜法測(cè)定川烏和附片中烏頭類生物堿含量。色譜柱為ODS柱；流動(dòng)相甲醇-水-乙腈(67∶33∶2)，pH4.5；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；柱溫35℃。平均回收率：中烏頭堿100.48%，RSD為1.47%；烏頭堿98.07%，RSD為1.7%；次烏頭堿100.65%，RSD為1.6%。朱瑞龍等［19］采用高效相色譜法測(cè)定附子理中丸中雙酯型烏頭堿含量。以甲醇-水-氯仿-二乙胺(70∶30∶30∶0.2)為流動(dòng)相；固定相為C18(10μm,4.6mm×250mm)；檢測(cè)波長(zhǎng)279nm，平均回收率：中烏頭堿97.8%，RSD為1.69%；烏頭堿96.0%，RSD為2.41%；次烏頭堿96.7%，RSD為1.98%。李薇等［20］采用高效液相色譜法測(cè)定肩痛散中烏頭總堿含量。色譜柱為YWG-C18H37(4.0mm×300mm)；流動(dòng)相甲醇-水-氯仿-三乙胺(70∶30∶1∶0.2)；檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，平均回收率為98.4%，RSD為2.57%。4　氣相色譜法

川烏、草烏是風(fēng)濕骨痛酒中的主要成分，戴忠等［21］采用氣相色譜法測(cè)定其中的酯型生物堿含量。色譜柱為2m×3mm玻璃柱填充102酸洗白色擔(dān)體(80-100目)；固體相10%DEGS+1%H3PO4；檢測(cè)器FID(230℃)；載氣氮?dú)?；柱?95℃，平均回收率為98.4%。5　堿量法

小活洛丸是由制川烏、制草烏等6種中藥組成。和中國(guó)藥典(1995)一部顏根寶等［22］采用有機(jī)溶劑萃取，樣品經(jīng)分離提純后采用堿量法測(cè)定其總烏頭生物堿含量。平均回收率為94.79%，RSD為2.14%。

鄧建平等［23］報(bào)道川烏、附片中烏頭類生物堿含量測(cè)定方法的比較研究。各種方法各有其優(yōu)點(diǎn)，堿量法適用于川烏、草烏、附子單味藥材烏頭生物堿含量測(cè)定。分光光度法一般只能測(cè)定烏頭生物堿總量，若采用改良異羥酸鐵比色法可測(cè)定酯型烏頭堿含量，但該方法靈敏度差，干擾因素較多，重現(xiàn)性不夠理想，有待進(jìn)一步研究改進(jìn)。薄層掃描法集分離、測(cè)定于一體，不僅可用于單味藥材川烏、草烏、附子中烏頭堿的含量測(cè)定，還廣泛應(yīng)用于含有川烏的復(fù)方中藥制劑中酯型生物堿含量測(cè)定。高效液相色譜法可分別測(cè)定中烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿的含量，該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，是目前復(fù)方中藥制劑中烏頭類生物堿含量測(cè)定的首選方法。