胃癌與免疫-抗體導(dǎo)向治療

本世紀(jì)初Ehrilich曾提出用抗體導(dǎo)向治療腫瘤的設(shè)想，并稱之為魔彈。近一個世紀(jì)來，人們不斷努力，反復(fù)實驗，但這一設(shè)想一直沒有很發(fā)實現(xiàn)。自1976年單克隆抗體技術(shù)問世以來，人們又燃起了應(yīng)用魔彈治療腫瘤的希望，理由是抗腫瘤單克隆抗體更加特異，抗原決定簇明確，可以大量生產(chǎn)，可能更適合于導(dǎo)向治療。進(jìn)入八十年代，我國就有許多實驗室 進(jìn)行胃癌單克隆抗體的制備工作，是很艱苦的工作，不一定能堅持下來。但是有些實驗室從胃癌單克隆抗體的制備，到最后用于臨床診斷和治療，通過不斷努力，做出了很好的成績。若要實現(xiàn)腫瘤的導(dǎo)向治療，而且卓有成效，必須經(jīng)以下幾個關(guān)鍵步驟。單克隆抗體的制備

目前單克隆抗體的制備多采取細(xì)胞融合的方法。國內(nèi)外產(chǎn)生胃癌單克隆抗體也是 采取 這個辦法。但要得到特異性好，效價高及親合力強的抗體，還必須采取許多措施。首先在選擇抗原上下功夫。樊代明、張學(xué)庸等所制備的MG系列胃癌單克隆抗體時，避免單純用細(xì)胞系，因為細(xì)胞系經(jīng)過長期培養(yǎng)總要丟掉某些抗原，而采用新鮮標(biāo)本可以彌補這個問題。他們用手術(shù)切除的新鮮胃癌標(biāo)本結(jié)合細(xì)胞系，原發(fā)病灶的細(xì)胞與轉(zhuǎn)移病灶的細(xì)胞并用，這樣容易得到不同的抗原決定簇的單克隆抗體，因而得到的MG系列有較多的類型。同時他們制備篩選了大量抗體，從幾十個雜交瘤細(xì)胞中精選出來幾株高效價，高親合力的，穩(wěn)定分泌的細(xì)胞株，組成MG系列。

第二個必要的措施是要選擇一種好的篩選抗體的方法。常用的篩選辦法是酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）及免疫組織化學(xué)的方法。從目前來看，以后者為好，它的優(yōu)點是組織切片中抗原成分很復(fù)雜，抗體與何種細(xì)胞成分反應(yīng)，一旦了然，如胃癌單克隆抗體，只應(yīng)同胃癌細(xì)胞反應(yīng)，若是其它細(xì)胞成分也反應(yīng)，如果不是非特異染色，就是抗原成分交叉，即有共同抗原。可以將非特異染色和交叉反應(yīng)的抗體丟掉，只留下較特異的抗體，所以用免疫組化篩選的效果全面而徹底，得到的信息多。在免疫組織化學(xué)的方法中，以ABC法比較敏感，即使反應(yīng)較弱的抗體也能顯示出來。免疫熒光間接法，用起來也很方便，但敏感性差一些，兩者都能節(jié)省時間。在篩選時還有一個問題城要注意，就是石蠟切片與冰凍切片枯一定情況下都要使用。篩選抗體時用石蠟切片，可以選出效價高，能在石蠟切片上染色的抗體。但是石蠟切片經(jīng)過了酒精及二甲苯脂溶劑的處理，脂性抗原已經(jīng)去掉，所以與脂溶性抗原有關(guān)的抗體不能篩選出來。在確定抗體與那些組織有交叉反應(yīng)時，則必須用冰凍切片，因為冰凍切片上，抗原未丟失，若無交叉反應(yīng)，才是真正的沒有交叉，所以用石蠟切片檢測抗體有無與其它組織反應(yīng)是不可靠的。單克隆抗體的特異性

單克隆抗體能在人體應(yīng)用有效，必須有較高的特異性及親合力。

首先必須與大多數(shù)胃癌標(biāo)本切片中的胃癌細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。如能對其中多數(shù)細(xì)胞和各種類型的胃癌都起陽性反應(yīng)則更好。MG系列的鼠鼠抗體對各種不同分化的胃癌陽性率為67%~100%，PCI抗體對胃癌的結(jié)合力是比較強的。

另一個檢測特異性的辦法是將抗體用核素標(biāo)記后注入帶人胃癌的裸鼠中，觀察有關(guān)抗體是否向人腫瘤中濃集。如將胃癌的單抗MGb2結(jié)合131I后，給荷人胃癌裸鼠注射，則可在體外顯像。在注射后第7天時，瘤正常組織的放射比為16.22，說明抗體可在胃癌中濃集16倍。同時可結(jié)合131Imgb抗體注入后，腫瘤生長慢，瘤組織中呈大片壞死，而空白對照，單純抗體的對照組腫瘤生長快，分裂相多而極少壞死。

在體外也可將抗體交聯(lián)抗癌藥物，加入胃細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)中，以觀察抗體結(jié)合藥物后比單純藥物或單純抗體有更強的導(dǎo)向殺傷作用。對殺傷的細(xì)胞的檢測，過去都用Cr51釋放，3HTdr 摻入等方法，現(xiàn)在多用噻唑蘭（MTT）的方法，此法不用核素，比較完全，準(zhǔn)確度也不差。當(dāng)然抗體在荷人腫瘤的裸鼠中能濃集，所以殺傷腫瘤作用也不明顯。因為單克隆抗體由鼠產(chǎn)生，對鼠的組織不發(fā)生反應(yīng)，只對所帶人的腫瘤反應(yīng)，所以這種濃集是順理成章的，但當(dāng)人用時，各種人的組織難免在抗原性上與人的胃癌有交叉反應(yīng)，所以濃集起來就困難得多。

當(dāng)然檢測單克隆抗體特異性的指標(biāo)還有許多，如在免疫電鏡下看標(biāo)記抗體是否能特異地與胃癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)結(jié)合或向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移（內(nèi)化）；還可以檢測抗體的親合力。單克隆抗體人體內(nèi)應(yīng)用

單克隆抗體的應(yīng)用很多，如用它作免疫組織化學(xué)的試劑，進(jìn)行病理診斷，用它裝備ELISA試劑盒進(jìn)行胃癌血清學(xué)診斷等。這些在MG系列及其它系列的胃癌單克隆抗體都有所報道。但是這里講的是如何把特異性好，在荷人腫瘤的裸鼠中能定位人的胃癌的抗體用于病人的診斷與治療。這種診斷與治療被稱為導(dǎo)向診斷及導(dǎo)向治療。

單克隆抗體用于人體前，必須進(jìn)行一些檢查：①無熱源；②作急性毒試驗，如給小鼠尾靜脈注射時，不發(fā)生死亡或病變等。并經(jīng)自愿者受試，不出現(xiàn)不良反應(yīng)，然后可申報衛(wèi)生部批準(zhǔn)進(jìn)行臨床病人應(yīng)用。達(dá)到國家生物制品鑒定部門的標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過在指定的醫(yī)院進(jìn)行Ⅱ期，Ⅲ期臨床試驗后，方能批準(zhǔn)在市場上出售。目前MG系列及PC系列均能 在病人身上用其核素標(biāo)記的抗體進(jìn)行顯像，作為腫瘤的診斷，也可用來進(jìn)行實驗治療，但尚未取得明確的療效報告。PC系列研制的產(chǎn)品在手術(shù)時可批示胃癌病灶或轉(zhuǎn)移病灶的部位，作為手術(shù)導(dǎo)向。人用鼠抗體存在的問題

目前大部分單克隆抗體是鼠鼠細(xì)胞融合而成的，抗體本質(zhì)上是鼠的免疫球蛋白。人用后，它可作為抗原使人體產(chǎn)生抗鼠的抗體，人抗鼠抗體很快與注入的鼠抗體發(fā)生作用，使鼠抗體很快失效清除。而鼠抗體對人來說是異種蛋白，容易發(fā)生過敏，所以目前要用鼠抗體，必須將其 進(jìn)行改造。一種辦法是由胃 蛋白酶消化鼠抗體使之成為F（Ab）2，這樣保留其與抗原作用的可變區(qū)，去除容易誘發(fā)過敏及抗體產(chǎn)生的FC段，這樣一來，產(chǎn)生人抗鼠抗體的機會就少一些。

目前大家都注意用基因工 程改造鼠抗體 的方法。因為用人人雜交瘤 產(chǎn)生人的單克隆抗體十分困難。解決的辦法有兩個，一是從病人的淋巴細(xì)胞中單克隆抗腫瘤的抗體基因，表達(dá)的抗體就是人的抗體；另一辦法是對鼠抗體進(jìn)行基因工程改造，例如可從鼠抗腫瘤單克隆抗體細(xì)胞系中提出其RNA，反轉(zhuǎn)錄成cNDA，用PCR擴(kuò)增，克隆出其輕鏈及重鏈的可變基因，把這種基因在真核細(xì)胞或載體中表達(dá)出來的一種或可變區(qū)蛋白，即是一種抗腫瘤的小抗體，或者把這種小抗體的基因與人的FC段的基因聯(lián)接，組成一個嵌合基因，可變區(qū)仍是鼠的，恒定區(qū)是人的，將來表達(dá)一種嵌合抗體。也有把輕鏈可變區(qū)基因與重鏈可變區(qū)聯(lián)接一條單鏈的抗體，這三條抗體為單鏈抗體、嵌合抗體、小抗體都可試用于臨床，看有無活性及診斷和治療效果。

另外的辦法是將抗腫瘤抗體的輕重鏈可變區(qū)基因與另一個效應(yīng)基因聯(lián)接，如把腫瘤壞死因子基因，CD8的基因或白細(xì)胞介素2-的基因與抗體基因聯(lián)接，試圖既發(fā)揮抗體的導(dǎo)向作用，又發(fā)揮使腫瘤發(fā)生壞死的腫瘤壞死因子的作用，這些改變是人們正在研究的，以達(dá)到鼠抗體人化目的的一些辦法